【输血医学基础】
1.血小板膜微粒与肝癌患者生物标志物的关联，对促进肝癌细胞的侵袭和转移的研究
背景 单采血小板（APs）在储存过程中释放的血小板膜微粒（PMPs）参与免疫调节和肿瘤过程。然而，很少有研究强调PMPs与肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）之间的关系。
方法 采用酶联免疫吸附试验( ELISA )进行检测肝癌患者和健康人血浆中的PMPs。分别采用ELISA和流式细胞术分析APs在贮藏0d、3d、5d、7 d后PMPs的变化。Transwell实验检测PMPs对肝癌细胞侵袭和迁移能力的影响。体内检测HCC相关指标及侵袭和迁移相关标志物。
结果 研究发现HCC患者中PMPs的数量显著增加。随着贮藏时间的延长，AP中PMPs的量也显著增加。此外，D5中的PMPs促进了HepG2和Huh7细胞的侵袭和迁移。转录组学揭示了与PMPs治疗相关的许多肿瘤转移相关基因的表达存在统计学差异。PMPs促进肝癌荷瘤小鼠肿瘤生长和体重减轻，Western blot结果显示侵袭和迁移相关指标也增加。
结论 PMPs在HCC患者血浆中的含量增加，同时也可以促进HCC的侵袭和迁移。
关键词：单采血小板（APs）；血小板膜微粒（PMPs）；肝细胞癌
文献来源：Li X, Ma Y, Liu C, Pu F, Zhang Y, Wang D. Platelet membrane-derived microparticles may be biomarkers in patients with hepatocellular carcinoma and can promote the invasion and metastasis of hepatoma carcinoma cells. Transfusion, 2023,63(10):1821-1831.
Correspondence author： LI Xiaofei, WANG Deqing
Email:15552889799@163.com； deqingw@vip.sina.com
投稿人：刘威
2023年10月5日
2.储存差异导致输血后小鼠对不同的红细胞抗原产生同种免疫的影响
介绍 血液储存对红细胞(RBC)同种异体免疫的影响仍然存在争议，一些研究表明红细胞诱导的同种异体抗体产生增强，而另一些研究未能观察到储存对同种异体抗体形成的任何影响。储存对患者红细胞异体免疫影响的评估,分析了针对多种异体抗原的抗体形成情况。研究发现不同的临床结果，可能反映了储存对特定抗原的异体免疫的不同影响。
方法 红细胞表达两种不同的模型抗原，HEL-OV A-Duffy (HOD)和KEL；它们同时或一起存在，将红细胞保存0d、8d、14d，并在输血前检测抗原水平。在输血后24h内评估供体红细胞的存活，在输血后5d和14d评估IgM和IgG抗体的产生。
结果 储存的HOD或KEL红细胞分别保留了相似的HEL或KEL抗原水平、但随着储存时间的增加，RBC的清除率也会增加。储存会增强针对HOD的IgG抗体的形成，而在输注储存的KEL红细胞后则会出现相反的结果。储存对HOD或KEL异体免疫的不同影响，并不反映HOD或KEL红细胞之间的内在差异、因为输注储存的HOD×KEL红细胞会增加IgG抗-HOD的产生，从而减少IgG抗-KEL的产生。
结论 这些数据表明储存对不同红细胞抗原免疫的双重影响，为临床经验的不一致，提供了可能的解释，并说明需要对红细胞储存与同种免疫之间的关系进行更深入的研究。
关键词：异源免疫；血液储存；输血
文献来源：Maier CL, Jajosky RP, Patel SR, et al. Storage differentially impacts alloimmunization to distinct red cell antigens following transfusion in mice[J].Transfusion. 2023 ，63(3):457-462.
Correspond author：Sean R. Stowell, Joint Program in Transfusion Medicine, Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, 630 E New Research Building, 77 Avenue Louis Pasteur, Boston, MA 02115, USA.
Email: srstowell@bwh.harvard.edu
投稿人：张笑妍 查占山
2023年10月10日
3.血小板添加剂溶液中浓缩血小板在储存过程中产生的补体激活产物,比储存在血浆中的少
背景 血小板输注可引起不良反应，比如非溶血性发热性输血反应（Febrile Non-Haemolytic Transfusion Reaction, FNHTR）。已有研究表明，损伤相关分子模式（Damage-Associated Molecular Patterns, DAMP）和补体在FNHTR中发挥作用。本研究分析了储存过程中血小板浓缩物在不同血小板储存液中含有的DAMPs和补体激活产物的性质。
材料和方法 将健康捐献者的白膜（Buffy Coats, BC）合并（每组15份BC），并分为3组，体积相同。加入不同的储存液[血浆、血小板添加液（PAS-C）或PAS-E；每组6例]，将白膜处理为血小板浓缩物（Platelet Concentrates, PC）。将去白细胞的血小板浓缩物储存在20℃～24℃的振荡仪上，在收集后的d1、d2、d6和d8采样，并检测质量参数：血小板活化、DAMPs[高迁移率族蛋白1 (High Mobility Group Box 1, HMGB1)，核小体]和补体活化产物。
结果 在储存期间，所有组的游离核小体水平相同，HMGB1浓度增加。所有血小板浓缩物中均观察到补体激活。然而，截至d8，添加液PAS使C3b/c水平降低了约90%，C4b/c水平降低了约65%。
讨论 核小体和HMGB1存在于血浆和PAS制备的血小板浓缩物中。储存过程中血浆和PAS中的血小板补体被激活。使用PAS储存时，由于PAS对血浆的稀释，补体激活产物的量较低。因此，储存在PAS中的血小板浓缩物比储存在血浆中的血小板浓缩物具有更少的补体激活产物。血小板浓缩物中这些促炎介质可能诱发FNHTR。
关键词：血小板输注；血小板储存；补体激活产物；核小体；HMGB1
文献来源：de Wit YES, Vlaar R, Gouwerok E, et al. Platelet concentrates in platelet additive solutions generate less complement activation products during storage than platelets stored in plasma.Blood Transfusion[J].2023，21(2):157-167.
Correspond author：Yasmin de Wit, Department Immunopathology Sanquin Blood Supply,Amsterdam, the Netherlands
Email：y.dewit@sanquin.nl.
投稿人：张智慧 秦爱华 钱宝华
2023年10月10日
4. VIII因子转运至CD4+T细胞形成其免疫原性需要几种类型的抗原呈递细胞
尽管使用凝血因子VIII（factor VIII，FVIII）抑制剂有超过80年的临床经验，但人们对血友病A替代治疗这一最严重并发症的体内机制知之甚少。约30%的患者会产生这些中和抗药物同种异体抗体。抑制剂的形成是T细胞依赖性的，但导致辅助性T细胞活化的事件一直难以捉摸，部分原因是脾脏复杂的解剖结构和细胞构成。在这里，我们发现FVIII抗原向CD4+T细胞的呈递关键取决于一组解剖学上不同的抗原呈递细胞，其中边缘区B细胞、边缘区和边缘区嗜金属巨噬细胞（而非红髓巨噬细胞，RPMFs）参与将FVIII转运到白髓，在白髓中，经典树突状细胞（Dendritic Cells，DCs）启动辅助性T细胞，后者分化为滤泡辅助性T细胞（follicular helper T，Tfh）。刺激Toll样受体9可加速Tfh细胞反应及生发中心和抑制因子的形成，而在血友病A小鼠中单独全身给予FVIII可增加单核细胞衍生和浆细胞样DCs的频率。此外，FVIII可促进另一种蛋白质抗原（卵清蛋白）激活的T细胞的增殖，而炎症信号缺陷的小鼠出现抑制的可能性较小，这表明FVIII可能具有内在的免疫刺激特性。与FVIII不同，卵清蛋白会被转移到RPMF室中，当以与FVIII相同的剂量给药时，不能引发T细胞增殖和抗体反应。总之，我们认为抗原运输模式可以有效地在体内递送到DC和并发生炎症信号传导，从而形成FVIII的免疫原性。
关键词：辅助性T细胞；凝血因子VIII；抗原呈递细胞；红髓巨噬细胞
文献来源：Kaczmarek R, Piñeros AR, Patterson PE, et al. Factor VIII trafficking to CD4+ T cells shapes its immunogenicity and requires several types of antigen-presenting cells. Blood[J]. 2023，142(3):290-305.
Correspondence author：Roland W. Herzog, Herman B Wells Center for Pediatric Research, Indiana University, Indianapolis, IN
Email: rwherzog@iu.edu
投稿人：毕佳琦 钱宝华
2023年10月10日
5.既往红细胞内抗原免疫可增强小鼠红细胞同种异体免疫
红细胞(Red Blood Cell, RBC)同种抗原抗体可增加受血者的输血反应发生和死亡的风险。然而，同种异体免疫率个体差异很大，一些患者在输血后从未产生同种抗体，而另一些患者不仅发生同种抗原免疫，而且在之后的输血中可能更容易产生额外的同种抗体。先前的研究表明，驱动同种抗体形成的CD4 T淋巴细胞应答是通过B淋巴细胞参与识别同种抗原。然而，由于红细胞在细胞内和红细胞表面都表达大量的抗原，因此，CD4 T淋巴细胞直接针对胞内抗原的应答反应是有可能增强其对红细胞表面抗原的同种免疫效应的。本研究中，我们发现B细胞可以获得红细胞内抗原。我们构建了能够表达两种不同同种抗原的供体红细胞小鼠模型，实验证明同种免疫可由胞内抗原启动，这种免疫目前无法被当前的输血相容性检测技术所检测，并可以直接影响之后由红细胞表面抗原暴露免疫的同种抗体产生。这些发现揭示了一种以前被低估的机制，即受血者可能会因为既往对细胞内抗原的免疫，而表现出更高的同种免疫发生率。
图A：红细胞供体产生示意图；图G、图H：GFP受体小鼠在输注GPAxGFP红细胞后形成了IgM型抗GPA抗体（输血后5d）和IgG型抗GPA抗体(输血后14d)。结果表明，对细胞内抗原的预先激发可能诱导原本无反应的受者产生红细胞的同种免疫反应。
关键词：红细胞抗原；同种异体；免疫反应
文献来源：Jajosky R, Patel SR, Wu SC, et al. Prior immunization against an intracellular antigen enhances subsequent red blood cell alloimmunization in mice[J]. Blood. 2023,141(21):2642-2653.
Correspondence author：Connie M. Arthur PhD, Joint Program in Transfusion Medicine Brigham and Women’s Hospital National Center for Functional Glycomics Harvard Medical School 630D New Research Building 77 Avenue Louis Pasteur Boston, MA 02115
Email:cmarthur@bwh.harvard.edu
投稿人：杨玥 顾海慧
2023年10月10日
6.冷藏单采血小板浓缩物中的血浆成分
背景 与室温（RT，22～24℃）储存相比，血小板浓缩物（PC）的冷藏具有一定的优势，因为冷藏可以降低细菌生长的风险，增强血小板的反应性。然而，低温（CT，2～6℃）储存也可能严重影响PC的血浆成分。本研究分析了单采血小板浓缩物（APC）中的血浆成分。
方法 APC在CT或RT血库条件下储存。在d0和d6，抽取样本进行分析。凝血参数包括整体凝血分析试验、单一因素或抑制剂。采用免疫印迹法研究了von Willebrand多聚体的分布模式。采用荧光测定法评估凝血酶的生成。免疫学和临床化学参数在自动分析仪上进行测定。
结果 在CT下储存后，凝血因子V、VII、IX或蛋白S活性均有部分降低，但与RT下相比，降低程度较小。在这两种温度下，因子VIII水平都是大幅降低。与RT相比，CT时von Willebrand因子（vWF）活性显著降低，并伴随着从高分子量多聚体向低分子量多聚体的转变。凝血酶生成在CT下能更好的保存。其他血浆蛋白如免疫球蛋白在这两种条件下都是稳定的。
结论 冷藏促进了APC中血浆凝固的二价效应。在CT下，不稳定凝血因子的部分减少不那么受关注;然而，CT并不能阻止凝血因子VIII的大量减少，但可通过多聚体裂解诱导vWF活性的降低。保存过程中凝血酶的生成,可能预示着冷藏条件下具有较强的止血功能。
关键词：血小板浓缩物；冷藏；凝血；vWF因子；凝血酶生成
文献来源：Kobsar A, Pfeifroth A, Klingler P, et al. Composition of plasma in apheresis-derived platelet concentrates under cold storage [J]. Blood Transfus. 2023，21(4):327-336.
Correspondence author：Kobsar Anna
Email: koessler_j@ukw.de
投稿人：张智慧
2023年10月10日
